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  • 食品大腸菌群檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題

    點(diǎn)擊次數(shù):1658  更新時(shí)間:2022-03-16
    1:食品中大腸菌群的檢測(cè)有兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)三種方法,該如何選擇呢?


    A:依據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的項(xiàng)目單位
    1.1、若單位為CFU/g,則選擇GB 4789.3-2016第二法(平板計(jì)數(shù)法)
    1.2、若單位為MPN/g,則選擇GB 4789.3-2016法(MPN計(jì)數(shù)法)
    1.3、若單位為MPN/100g,則選擇GB/T 4789.3-2003。

    2:MPN法3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度該怎樣選擇?
    A:依據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)值
    2.1、若標(biāo)準(zhǔn)值為<3.0MPN/g,則選擇0.1g、0.01g、0.001g三個(gè)稀釋度。
    2.2、若標(biāo)準(zhǔn)值為≤30MPN/100g,則選擇1g、0.1g、0.01g三個(gè)稀釋度。

    樣品采集

    怎樣采樣,才能使樣品具有代表性?

    這里將樣品分為兩類:預(yù)包裝食品和散裝食品或現(xiàn)場(chǎng)制作食品

    (1)、對(duì)于預(yù)包裝食品
    ① 應(yīng)采集相同批次、獨(dú)立包裝、適量件數(shù)的食品樣品,每件樣品的采樣量應(yīng)滿足微生物項(xiàng)目檢驗(yàn)的要求。
    ② 獨(dú)立包裝小于、等于1000g 的固態(tài)食品或小于、等于1000mL 的液態(tài)食品,取相同批次的包裝。
    ③ 獨(dú)立包裝大于1000mL 的液態(tài)食品,應(yīng)在采樣前搖動(dòng)或用無(wú)菌棒攪拌液體,使其達(dá)到均質(zhì)后采集適量樣品,放入同一個(gè)無(wú)菌采樣容器內(nèi)作為一件食品樣品;大于1000g 的固態(tài)食品,應(yīng)用無(wú)菌采樣器從同一包裝的不同部位分別采取適量樣品,放入同一個(gè)無(wú)菌采樣容器內(nèi)作為一件食品樣品。

    (2)、對(duì)于散裝食品或現(xiàn)場(chǎng)制作食品
    用無(wú)菌采樣工具從 n 個(gè)不同部位現(xiàn)場(chǎng)采集樣品,放入 n 個(gè)無(wú)菌采樣容器內(nèi)作為 n 件食品樣品。每件樣品的采樣量應(yīng)滿足微生物項(xiàng)目檢驗(yàn)單位的要求。

    培養(yǎng)基制備過(guò)程容易出現(xiàn)問(wèn)題解答

    1、異?,F(xiàn)象一:培養(yǎng)基不凝固
    原因分析:
    ①制備過(guò)程中過(guò)度加熱;
    ②低pH造成培養(yǎng)基酸解;
    ③稱量不正確;
    ④瓊脂未*溶解;
    ⑤培養(yǎng)基成分未充分混勻。
    2、異常現(xiàn)象二:pH不正確
    原因分析:
    ①制備過(guò)程中過(guò)度加熱;
    ②水質(zhì)不佳;
    ③外部化學(xué)物質(zhì)污染;
    ④測(cè)定pH時(shí)溫度不正確;
    ⑤pH計(jì)未正確校準(zhǔn);
    ⑥脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。
    3、異?,F(xiàn)象三:顏色異常
    原因分析:
    ①制備過(guò)程中過(guò)度加熱;
    ②水質(zhì)不佳;
    ③pH不正確;
    ④外來(lái)污染;
    ⑤脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。
    4、異常現(xiàn)象四:產(chǎn)生沉淀
    原因分析:
    ①制備過(guò)程中過(guò)度加熱;
    ②水質(zhì)不佳;
    ③脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差;
    ④pH計(jì)未正確控制。
    5、異?,F(xiàn)象五:培養(yǎng)基出現(xiàn)抑制/低的生長(zhǎng)率
    原因分析:
    ①制備過(guò)程中過(guò)度加熱;
    ②脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差;
    ③水質(zhì)不佳;
    ④使用成分不正確,如:成分稱量不準(zhǔn),添加劑濃度不正確;
    ⑤制備容器或水中的有毒殘留物。
    6、異?,F(xiàn)象六:選擇性差
    原因分析:
    ①制備過(guò)程中過(guò)度加熱;
    ②脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差;
    ③配方使用不對(duì);
    ④添加成分的加入不正確,例如加入添加成分時(shí)培養(yǎng)基過(guò)熱或添加濃度錯(cuò)誤;
    ⑤添加劑污染。
    7、異?,F(xiàn)象七:污染
    原因分析:
    ①不適當(dāng)?shù)臏缇?/span>
    ②無(wú)菌操作技術(shù)存在問(wèn)題;
    ③添加劑污染。

    實(shí)驗(yàn)過(guò)程

    1、平板法VRBA傾注完,待瓊脂凝固后為什么需要加3-4mL的覆蓋層?
    A:因?yàn)榇竽c菌群是需氧及兼性厭氧的,再加一層瓊脂相當(dāng)于造就一個(gè)半?yún)捬醐h(huán)境,促進(jìn)兼性厭氧菌的生長(zhǎng),同時(shí)抑制其他菌的生長(zhǎng)。除此之外,還有防止菌落蔓延的作用,防止遷徙性菌落對(duì)菌落計(jì)數(shù)構(gòu)成影響。例如一些變形桿菌就會(huì)有遷徙現(xiàn)象,從而導(dǎo)致菌落長(zhǎng)成一片無(wú)法區(qū)分。在表面多覆蓋一層培養(yǎng)基就可以避免這種情況的發(fā)生。

    2、GB 4789.3-2016平板法驗(yàn)證菌落如何挑???
    A:分別計(jì)數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落數(shù)。按比例挑取10個(gè)不同類型的典型和可疑菌落,少于10個(gè)菌落的挑取全部典型和可疑菌落。假如在1:10的平板上可疑大腸菌群有10個(gè),典型大腸菌群有6個(gè)。證實(shí)實(shí)驗(yàn)應(yīng)該按照可疑跟典型5:3的比例進(jìn)行挑取,移種于BGLB肉湯管內(nèi)。

    結(jié)果處理


    1.所有稀釋度都不在計(jì)數(shù)范圍內(nèi)怎么辦?

    這種情況一般都是稀釋度的平板都小于15CFU,這種情況就是以稀釋度的平板菌落數(shù)乘以驗(yàn)證試驗(yàn)的比例來(lái)計(jì)算。例如10倍稀釋的兩個(gè)平板上菌落數(shù)分別為10、8,菌落數(shù)為10的平皿挑取10個(gè)菌落復(fù)發(fā)酵中有8個(gè)菌落產(chǎn)氣,菌落數(shù)為8的平皿挑取8個(gè)菌落復(fù)發(fā)酵中有7個(gè)菌落產(chǎn)氣,則計(jì)算過(guò)程是這樣的:(10*8/10+8*7/8)/2*10=75CFU/g(mL)。

     

    2.連續(xù)兩個(gè)稀釋度的四個(gè)平皿的菌落數(shù)都在計(jì)數(shù)范圍內(nèi)怎么辦?

    這個(gè)需要參考菌落總數(shù)檢測(cè)國(guó)標(biāo)里7.1.2里的公式計(jì)算。我們需要先計(jì)算每個(gè)平皿的驗(yàn)證后的菌落數(shù),再代入公式計(jì)算即可。例如10倍稀釋度兩個(gè)平皿菌落數(shù)為120和125,100倍稀釋度兩個(gè)平皿的菌落數(shù)為17和16,經(jīng)過(guò)復(fù)發(fā)酵驗(yàn)證產(chǎn)氣的管數(shù)分別為7、8、8、8,則我們先計(jì)算每個(gè)平皿上的菌落數(shù)分別為120*7/10=84,125*8/10=100,17*8/10=13.6(我們計(jì)14),16*8/10=12.8(我們計(jì)13),然后將84、100、14、13四個(gè)數(shù)代入公式:(84+100+14+13)/(2+0.2)*10=959,結(jié)果應(yīng)報(bào)告960CFU/g(mL)。

     

    3.只有一個(gè)稀釋度的一個(gè)平皿的菌落數(shù)在計(jì)數(shù)范圍,其他均不在計(jì)數(shù)范圍怎么辦?

    這樣我們只需要復(fù)發(fā)酵驗(yàn)證這一個(gè)平皿即可,根據(jù)這一個(gè)平皿的菌落數(shù)進(jìn)行報(bào)告。例如10倍稀釋度兩個(gè)平皿菌落數(shù)為160和142,100倍稀釋度兩個(gè)平皿的菌落數(shù)為12和13,則我們只需要從菌落數(shù)為142CFU的平皿里挑取10個(gè)菌落進(jìn)行復(fù)發(fā)酵驗(yàn)證即可,假如共有7支發(fā)酵管陽(yáng)性,則應(yīng)計(jì)算142*7/10=99.4,結(jié)果報(bào)告990CFU/g(mL)。

     


    注意:對(duì)于結(jié)果檢出的平板或試管需要經(jīng)過(guò)無(wú)害化處理(121℃滅菌30分鐘)方能棄去,防止對(duì)環(huán)境造成污染



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